Количественное определение билирубина в лекарственных препаратах альбумина человека методом флуоресцентной спектроскопии

Abstract

Целью настоящего исследования является разработка методического подхода к спектрофлуориметрическому определению билирубина в лекарственных препаратах (ЛП) альбумина человека. Наличие полосы испускания с максимумом при длине волны 520 нм в спектре флуоресценции свидетельствует о присутствии билирубина в ЛП «Альбуфарм, раствор для инфузий 200 мг/мл» (СП ООО «Фармлэнд», Республика Беларусь). Для расчета концентрации билирубина использован модифицированный нами метод стандартных добавок. Показано, что последовательное внесение добавок билирубина в разбавленный в 10 и 20 раз ЛП «Альбуфарм» приводит к увеличению интенсивности флуоресценции, обусловленному исключительно возрастанием концентрации свободного билирубина, а не связанного с альбумином, так как установлено, что процесс связывания является медленным. С учетом квантовых выходов флуоресценции свободного и связанного билирубина предложена формула для расчета интенсивности флуоресценции связанного билирубина. Получены графики линейной зависимости интенсивности флуоресценции связанного билирубина от концентрации добавленного билирубина в разбавленном в 10 и 20 раз ЛП «Альбуфарм». Концентрация билирубина в ЛП «Альбуфарм» составила 5,26 ± 0,04 мкМ, или 0,0154 ± 0,0001 мг/г альбумина. Исходя из литературных данных по содержанию связанного с альбумином билирубина в плазме крови здорового человека (в среднем 0,11 мг/г альбумина), можно сделать вывод, что применяемая технология очистки альбумина обеспечивает значительное снижение содержания билирубина.

The purpose of this research is to develop a methodological approach to spectrofluorimetric determination of bilirubin in human albumin medicinal preparations. The emission band maximum at 520 nm wavelength in the fluorescence spectrum indicates the presence of bilirubin in the medicinal preparation "Albupharm, solution for infusions of 200 mg/ml" (JV Pharmland LLC, Republic of Belarus). We used a modified method of standard additions to calculate bilirubin concentration. It has been shown that sequential addition of bilirubin to a medicinal preparation "Albupharm", diluted 10 and 20 times, leads to an increase in fluorescence intensity due to an increase in the concentration of free bilirubin only, but not bound to albumin, since the binding process was found to be slow. Taking into account the fluorescence quantum yields of free and bound bilirubin a formula for calculating fluorescence intensity of the bound bilirubin has been proposed. Graphs of linear dependence of fluorescence intensity of bound bilirubin on the concentration of added bilirubin in a 10 and 20 times diluted medicinal preparation "Albupharm" were obtained. The concentration of bilirubin in a medicinal preparation "Albupharm" was 5,26 ± 0,04 mM, or 0,0154 ± 0,0001 mg/g of albumin. Based on the literature data on the content of albumin-bound bilirubin in blood plasma of a healthy person (average 0,11 mg/g albumin), we can conclude that albumin purification technology used provides a significant decrease in bilirubin content.